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en la sala de muestreo de dicha institu-
ción, y transportados al "Laboratorio de
Tecnología de los Productos Pesqueros",
donde se acondicionaron en bolsas de
polietileno y se congelaron a -25°C, has-
ta su uso. Posteriormente, fueron corta-
dos en secciones de 2 a 3 mm aproxima-
3
damente y triturados durante 30 segun-
dos utilizando un molino doméstico.
Caracterización de la materia prima
Para caracterizar los hígados de raya se
analizó su composición proximal. Las
proteínas se determinaron por el méto-
do Kjeldahl, (AOAC, 240.27; 1990).
Para la transformación del nitrógeno
en proteína bruta se utilizó el factor
conversión N*6,25. La humedad se
cuantificó mediante desecación en estu-
fa a temperatura de 105 ºC hasta peso
constante (AOAC, 952.08; 1990). Las
cenizas se determinaron por calcina-
ción en mufla a 550 ºC de temperatura,
hasta la obtención de cenizas blancas y
peso constante (AOAC, 938.08; 1990).
Los lípidos fueron extraídos y cuantifi-
cados por el método de Bligh & Dyer,
(1959). Los extractos lipídicos de todas
las muestras fueron almacenados en
Eppendorf y conservados a -80 ºC hasta
su posterior uso.
Procedimiento de extracción de aceite
Se estudiaron 3 métodos diferentes de
extracción de aceite. La Figura 1 esque-
matiza los protocolos de extracción y se
detalla el procedimiento realizado para
cada método.
1-Extracción con enzimas EE:
En el proceso enzimático se utilizó la
enzima Purazyme AS 60 L (alkaline
serine proteasa, de
Bacillus licherni-
formis
), producto considerado GRAS
(Generally Recognized as Safe) para la
modificación de proteínas y producción
de alimentos para mascotas, entre otras
aplicaciones.
La hidrólisis se realizó en un reactor
termostatizado con agitación constante.
Se mezclaron partes iguales de hígados
triturados (aproximadamente 50 gramos)
y agua destilada a 50 ºC. La mezcla se
estabilizó en las condiciones óptimas de
la enzima utilizada (pH 8,0 ± 0,3 y tem-
peratura en 55 ± 2,5 ºC). El proceso de
hidrólisis se inició con el agregado de la
proteasa (relación enzima/materia prima
2 %), siendo el pH controlado con la adi-
ción de NaOH 1M. La reacción enzimá-
tica tuvo una duración de 1 hora y pos-
teriormente la temperatura se aumentó a
85 °C durante 10 minutos para inactivar
la enzima. El hidrolizado se centrifugó
a 20000 g durante 30 minutos a 4 °C.
Después de la centrifugación, los tubos
se colocaron en posición vertical en con-
gelador (a -20 °C) y todas las fracciones:
lodos (o fases insolubles), fase oleosa y
acuosa proteica fueron separadas cortan-
do el contenido congelado de los tubos.
2- Extracción en frío EF:
Se mezclaron partes iguales de hígados
triturados (aproximadamente 50 gramos)
y agua destilada a 50 ºC (1:1, p/v) con
agitación enérgica durante 5 minutos,
a fin de formar una pulpa homogénea.
Durante este procedimiento la tempera-
tura no excedió los 15 °C. A continua-
A&G 116
• Tomo XXIX • Vol. 3 • 426-434 • (2019)
428
· AC e IT e S m ARIN o S ·
Figura 1 - Esquema de los diferentes métodos de extracción de aceite estudiados.
ción, y transportados al "Laboratorio de
Tecnología de los Productos Pesqueros",
donde se acondicionaron en bolsas de
polietileno y se congelaron a -25°C, has-
ta su uso. Posteriormente, fueron corta-
dos en secciones de 2 a 3 mm aproxima-
3
damente y triturados durante 30 segun-
dos utilizando un molino doméstico.
Caracterización de la materia prima
Para caracterizar los hígados de raya se
analizó su composición proximal. Las
proteínas se determinaron por el méto-
do Kjeldahl, (AOAC, 240.27; 1990).
Para la transformación del nitrógeno
en proteína bruta se utilizó el factor
conversión N*6,25. La humedad se
cuantificó mediante desecación en estu-
fa a temperatura de 105 ºC hasta peso
constante (AOAC, 952.08; 1990). Las
cenizas se determinaron por calcina-
ción en mufla a 550 ºC de temperatura,
hasta la obtención de cenizas blancas y
peso constante (AOAC, 938.08; 1990).
Los lípidos fueron extraídos y cuantifi-
cados por el método de Bligh & Dyer,
(1959). Los extractos lipídicos de todas
las muestras fueron almacenados en
Eppendorf y conservados a -80 ºC hasta
su posterior uso.
Procedimiento de extracción de aceite
Se estudiaron 3 métodos diferentes de
extracción de aceite. La Figura 1 esque-
matiza los protocolos de extracción y se
detalla el procedimiento realizado para
cada método.
1-Extracción con enzimas EE:
En el proceso enzimático se utilizó la
enzima Purazyme AS 60 L (alkaline
serine proteasa, de
Bacillus licherni-
formis
), producto considerado GRAS
(Generally Recognized as Safe) para la
modificación de proteínas y producción
de alimentos para mascotas, entre otras
aplicaciones.
La hidrólisis se realizó en un reactor
termostatizado con agitación constante.
Se mezclaron partes iguales de hígados
triturados (aproximadamente 50 gramos)
y agua destilada a 50 ºC. La mezcla se
estabilizó en las condiciones óptimas de
la enzima utilizada (pH 8,0 ± 0,3 y tem-
peratura en 55 ± 2,5 ºC). El proceso de
hidrólisis se inició con el agregado de la
proteasa (relación enzima/materia prima
2 %), siendo el pH controlado con la adi-
ción de NaOH 1M. La reacción enzimá-
tica tuvo una duración de 1 hora y pos-
teriormente la temperatura se aumentó a
85 °C durante 10 minutos para inactivar
la enzima. El hidrolizado se centrifugó
a 20000 g durante 30 minutos a 4 °C.
Después de la centrifugación, los tubos
se colocaron en posición vertical en con-
gelador (a -20 °C) y todas las fracciones:
lodos (o fases insolubles), fase oleosa y
acuosa proteica fueron separadas cortan-
do el contenido congelado de los tubos.
2- Extracción en frío EF:
Se mezclaron partes iguales de hígados
triturados (aproximadamente 50 gramos)
y agua destilada a 50 ºC (1:1, p/v) con
agitación enérgica durante 5 minutos,
a fin de formar una pulpa homogénea.
Durante este procedimiento la tempera-
tura no excedió los 15 °C. A continua-
A&G 116
• Tomo XXIX • Vol. 3 • 426-434 • (2019)
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· AC e IT e S m ARIN o S ·
Figura 1 - Esquema de los diferentes métodos de extracción de aceite estudiados.
