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· eNSA Y o S , I NV e STIGACI o N e S Y T RANSF e R e NCIA de Te CN olo GÍA ·

EXII, con un voltaje de funcionamiento fato 25 mM de pH 8. La determinación mezclado con 11 g de microesferas de
de 120 kV. La superficie específica se del contenido de proteína no inmoviliza- vidrio de diámetro 150 µm para evitar
determinó utilizando un Micromeritics da se llevó a cabo mediante un ensayo de la obstrucción de la columna y luego
Pulse ChemiSorb 2700 por el método Bradford (Bradford, 1976). Se tomaron varillas de vidrio de largo aproximado
Brunauer-Emmett-Teller (BET). Las 10 µL del sobrenadante de la primera 0,5 cm hasta completar el volumen de la
muestras se secaron previamente usando centrifugación y se mezclaron con 190 columna. Se hizo pasar en ella una mez-
un flujo de N durante 3 horas a 350 °C. µL de reactivo de Bradford (1x). La cla de aceite de girasol y etanol 96% en
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absorbancia a λ = 595 nm se determinó proporción molar 1/3 a flujo constante
por medio de un espectrofotómetro Cary de 0,5 mL/min y se tomaron muestras
Inmovilización de lipasa de Pseudo- 50. El contenido de proteína se estimó a diferente tiempo. Estas muestras fue-
monas fluorescens en el soporte por medio de una curva de calibración ron diluidas a un volumen de 1 mL con
obtenida utilizando concentraciones de acetonitrilo, filtradas con un filtro de
Se preparó una solución de lipasa 0,05; 0,1; 0,25; 0,5 y 1 mg/mL de BSA tamaño de poro de 0,2 µm y analizadas
comercial con concentración 5 mg/mL (98%) como proteína estándar. El mate- por HPLC.
en buffer fosfato 25 mM de pH 8. Se rial híbrido obtenido a partir de la inmo-
suspendió 0,125 g del soporte en 10 mL vilización enzimática de 400 mg /
enzima
de la solución anterior para obtener una g fue nombrado como L /SBA-15. Análisis cromatográfico (HPLC)
soporte PF
relación óptima de 400 mg /g
enzima soporte
(Ferrero et al., 2016). La suspensión se Los análisis se realizaron con un HPLC
mantuvo con agitación suave a tempera- Reacción de producción de mono- y Perkin Elmer con detector UV-vis de la
tura ambiente por 24 horas, luego se cen- di-glicéridos serie 200 equipado con una unidad de
trifugó para quitar el sobrenadante y se suministro de solvente con gradiente de
lavó dos veces con 10 mL de buffer fos- Para el desarrollo de un reactor continuo elución binario, una columna Agilent
(Figura 1) se utilizó una columna de 24 Eclipse Plus 18 (C18 con un diámetro
Figura 1. Esquema del reactor continuo cm × 0,6 cm, se la termostatizó a 37 °C y de 4,6 mm × 25 cm de longitud y un
utilizado: 1) Plancha de calentamiento, 2)
Tanque mezclador de reactivos, 3) Bomba se agregó en ella 1g de L /SBA-15(2,5) tamaño de partícula de 5 μm), el soft-
PF
peristáltica, 4) Columna termostatizada,
5) Controlador de temperatura.
Figura 2 - Caracterización estructural del soporte mesoporoso SBA-15:
a) patrones de SAXS, b) Imagen de TEM.

Figura 3 - Cromatograma de productos de reacción utilizando LPF/SBA-15 como catalizador y aceite de girasol comercial con etanol al 96% en proporción 1/3.
Monoglicéridos FAEEs
Diglicéridos Triglicéridos

ácidos grasos
libres

476 A&G 108 • Tomo XXVII • Vol. 3 • 474-478 • (2017)