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lubles en acetona” en el aceite crudo de
soja es 30-31,7 (9, 10) porque contiene
cantidades sustanciales de lípidos sin
fósforo, es decir, glicolípidos y lípi-
dos neutros. Sin embargo, la validez
de dicho factor cuando se utiliza para
aceites desgomados y refinados ha sido
cuestionada recientemente (11). Por otro
lado, el factor dado para otros aceites
crudos es 25,5 (ver L.V. Cocks and C.
Vanrede, A Laboratory Handbook for
Fat and Oil Analysis, Academic Press,
New York, 1966, pp. 37-147) y fue cal-
culado a partir de una lecitina con la fór-
mula empírica C H PO N (12).
44
86
9
El fin de este estudio fue (a) determinar
de manera más precisa el Mw de los PL
individuales en base a sus composicio-
nes de ácidos grasos, (b) utilizar dichos
resultados y las composiciones de PL
de los aceites para calcular el promedio
respectivo del Mw de los PL y (c) usar
dichos pesos para calcular los factores
de conversión para los aceites crudos de
soja y girasol.
· Materiales y métodos
Se extrajeron los aceites crudos a partir
de semillas maduras de soja (mezcla de
variedades) y girasol (variedad Master
Farmer) con cloroformo/metanol (2:1)
después de haber sido molidas en nitró-
geno líquido como fue descrito previa-
mente (13). El aceite crudo se centrifu-
gó a 23.400 × g y se extrajo el aceite
sobrenadante claro. El pellet remanente
fue enjuagado varias veces con cloro-
formo y disuelto en aproximadamente
2 ml de cloroformo. Para el estudio se
utilizó el aceite sobrenadante claro y
el pellet disuelto separadamente como
fuentes de PL, utilizando el aceite para
determinar su composición de PL y el
pellet para determinar la composición
de ácidos grasos de los PL.
Los PL individuales fueron separados
con cromatografía de capa delgada
bidimensional (TLC-2D) usando placas
previamente revestidas con silica gel 60
(14) e identificadas con reactivos especí-
ficos en aerosol (15). En una misma pla-
ca se identificaron separadamente dos
muestras (pellets disueltos precedente-
mente mencionados) (2,0 mg; 3 × 5 μl)
sobre las esquinas del lado izquierdo y
derecho. Ambas muestras se eluyeron
con solvente básico (cloroformo/meta-
nol/ hidróxido de amonio 7 N, 65:30:4)
por 10 cm; luego, después de secar con
una secadora manual, la placa se rotó a
90° y una de las muestras fue eluida con
solvente ácido (cloroformo/metanol/áci-
do acético/agua, 170:25:25:4) por 9,0
cm. Después del secado, la placa se rotó
a 180° y la otra muestra se eluyó con
solvente ácido por 9,0 cm. Se superpu-
sieron cantidades reducidas de lípidos
neutros y ácidos grasos libres de las dos
muestras; sin embargo, esto no afectó la
separación de los PL (Figura 1). De 5 a
6 de esos cromatogramas rindieron sufi-
cientes PL individuales para los análisis
de ácidos grasos. También se obtuvo la
composición de PL de los aceites crudos
de soja y girasol usando una TLC-2D
con un sistema de 3 solventes, como fue
descrito previamente (13). Después de
la visualización usando iodo, cada man-
cha de PL fue colocada cuidadosamente
en un tubo de ensayo de 15 × 150 mm.
Los PL individuales fueron saponifica-
dos con 2,0 ml de 0,5 N NaOH/CH OH
3
a 83 °C durante 6 minutos si extraer el
silica gel. Los ácidos grasos fueron este-
rificados con 3,0 ml de BCl /CH OH
3
3
(10 %) a 83 °C durante 5,5 minutos.
De la mezcla de reacción se extrajeron
los ésteres metílicos de los ácidos gra-
sos con hexano y el volumen se redujo
a aproximadamente 0,2 ml con un flujo
de nitrógeno seco. Los ésteres metílicos
fueron analizados utilizando cromato-
grafía gas-líquido (GLC) en las condi-
ciones descritas previamente (16).
· Resultados y discusión
Según lo determinado por la TLC-2D
y el reactivo en aerosol de molibdato
(Tabla 1) la soja contenía 7 PL. Tres PL
no fueron identificados y representaban
el 12,5 % del total. Los datos sobre los
PL de la soja concordaron bien con los
resultados de Harwood (17) y con los
de Privet
et al
. (4). Solo se utilizaron
4 de los principales PL identificados
para los análisis de ácidos grasos. En
el girasol solo se detectaron 4 PL; sus
identidades y su distribución relativa
se compararon favorablemente con los
hallazgos de Boroulina
et al
. (18). Sin
A&G 118
• Tomo XXX • Vol. 1 • 122-125 • (2020)
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Factor de conversión para determinar el contenido de fosfolípidos en los aceites crudos de soja y girasol
Figura 1 - TLC-2D de dos muestras lipídicas de
soja cruda en una placa de la TLC. Los orígenes
son menores en las esquinas del lado izquierdo
y derecho. Solvente básico (#1), cloroformo/
metanol/NH OH 7 N, 65:30:4, de abajo hacia
4
arriba. Solvente ácido (#2), cloroformo/metanol/
ácido acético/agua, 170:25:25:4, de derecha a
izquierda, y después del secado, de izquierda
a derecha.
Las manchas se identifican como 1: fosfatidilinositol;
2: fosfatidilcolina; 3: fosfatidiletanolamina; 4: ácido
fosfatídico. Los fosfolípidos del girasol migraron de
la misma manera y las placas eran idénticas a la
mostrada.
Tabla 1 - Composiciones de fosfolípidos de los aceites crudos de soja y girasol
Fosfolípidos individuales (%) en el total de fosfolípidos
a
soja
Girasol
mezcla de
variedad master
variedades
Harwood
privett
Farmer
borodulina
Fosfolípido
(este estudio)
(1975)
b
(1973)
c
(este estudio)
(1974)
ácido fosfatídico
4,8
1,5
5,0
2,2
2,2
Fosfatidilinositol
20,3
17,5
14,0
27,9
24,0
Fosfatidiletanolamina
23,3
21,4
26,0
21,2
18,2
Fosfatidilcolina
39,0
43,6
45,0
48,7
55,4
Desconocidos
12,5
4,3
6,3
-
-
a
Basado en análisis de P de los fosfolípidos individuales y totales.
b
La composición también incluyó, cardiolipina - 3,7 %; fitoglicolípidos - 6,1 %; N-acilfosfatidiletanolamina - 1,1 %.
c
La composición también incluyó, fosfatidil glicerol-difosfatidil glicerol - 3,3 %.
soja es 30-31,7 (9, 10) porque contiene
cantidades sustanciales de lípidos sin
fósforo, es decir, glicolípidos y lípi-
dos neutros. Sin embargo, la validez
de dicho factor cuando se utiliza para
aceites desgomados y refinados ha sido
cuestionada recientemente (11). Por otro
lado, el factor dado para otros aceites
crudos es 25,5 (ver L.V. Cocks and C.
Vanrede, A Laboratory Handbook for
Fat and Oil Analysis, Academic Press,
New York, 1966, pp. 37-147) y fue cal-
culado a partir de una lecitina con la fór-
mula empírica C H PO N (12).
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El fin de este estudio fue (a) determinar
de manera más precisa el Mw de los PL
individuales en base a sus composicio-
nes de ácidos grasos, (b) utilizar dichos
resultados y las composiciones de PL
de los aceites para calcular el promedio
respectivo del Mw de los PL y (c) usar
dichos pesos para calcular los factores
de conversión para los aceites crudos de
soja y girasol.
· Materiales y métodos
Se extrajeron los aceites crudos a partir
de semillas maduras de soja (mezcla de
variedades) y girasol (variedad Master
Farmer) con cloroformo/metanol (2:1)
después de haber sido molidas en nitró-
geno líquido como fue descrito previa-
mente (13). El aceite crudo se centrifu-
gó a 23.400 × g y se extrajo el aceite
sobrenadante claro. El pellet remanente
fue enjuagado varias veces con cloro-
formo y disuelto en aproximadamente
2 ml de cloroformo. Para el estudio se
utilizó el aceite sobrenadante claro y
el pellet disuelto separadamente como
fuentes de PL, utilizando el aceite para
determinar su composición de PL y el
pellet para determinar la composición
de ácidos grasos de los PL.
Los PL individuales fueron separados
con cromatografía de capa delgada
bidimensional (TLC-2D) usando placas
previamente revestidas con silica gel 60
(14) e identificadas con reactivos especí-
ficos en aerosol (15). En una misma pla-
ca se identificaron separadamente dos
muestras (pellets disueltos precedente-
mente mencionados) (2,0 mg; 3 × 5 μl)
sobre las esquinas del lado izquierdo y
derecho. Ambas muestras se eluyeron
con solvente básico (cloroformo/meta-
nol/ hidróxido de amonio 7 N, 65:30:4)
por 10 cm; luego, después de secar con
una secadora manual, la placa se rotó a
90° y una de las muestras fue eluida con
solvente ácido (cloroformo/metanol/áci-
do acético/agua, 170:25:25:4) por 9,0
cm. Después del secado, la placa se rotó
a 180° y la otra muestra se eluyó con
solvente ácido por 9,0 cm. Se superpu-
sieron cantidades reducidas de lípidos
neutros y ácidos grasos libres de las dos
muestras; sin embargo, esto no afectó la
separación de los PL (Figura 1). De 5 a
6 de esos cromatogramas rindieron sufi-
cientes PL individuales para los análisis
de ácidos grasos. También se obtuvo la
composición de PL de los aceites crudos
de soja y girasol usando una TLC-2D
con un sistema de 3 solventes, como fue
descrito previamente (13). Después de
la visualización usando iodo, cada man-
cha de PL fue colocada cuidadosamente
en un tubo de ensayo de 15 × 150 mm.
Los PL individuales fueron saponifica-
dos con 2,0 ml de 0,5 N NaOH/CH OH
3
a 83 °C durante 6 minutos si extraer el
silica gel. Los ácidos grasos fueron este-
rificados con 3,0 ml de BCl /CH OH
3
3
(10 %) a 83 °C durante 5,5 minutos.
De la mezcla de reacción se extrajeron
los ésteres metílicos de los ácidos gra-
sos con hexano y el volumen se redujo
a aproximadamente 0,2 ml con un flujo
de nitrógeno seco. Los ésteres metílicos
fueron analizados utilizando cromato-
grafía gas-líquido (GLC) en las condi-
ciones descritas previamente (16).
· Resultados y discusión
Según lo determinado por la TLC-2D
y el reactivo en aerosol de molibdato
(Tabla 1) la soja contenía 7 PL. Tres PL
no fueron identificados y representaban
el 12,5 % del total. Los datos sobre los
PL de la soja concordaron bien con los
resultados de Harwood (17) y con los
de Privet
et al
. (4). Solo se utilizaron
4 de los principales PL identificados
para los análisis de ácidos grasos. En
el girasol solo se detectaron 4 PL; sus
identidades y su distribución relativa
se compararon favorablemente con los
hallazgos de Boroulina
et al
. (18). Sin
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Factor de conversión para determinar el contenido de fosfolípidos en los aceites crudos de soja y girasol
Figura 1 - TLC-2D de dos muestras lipídicas de
soja cruda en una placa de la TLC. Los orígenes
son menores en las esquinas del lado izquierdo
y derecho. Solvente básico (#1), cloroformo/
metanol/NH OH 7 N, 65:30:4, de abajo hacia
4
arriba. Solvente ácido (#2), cloroformo/metanol/
ácido acético/agua, 170:25:25:4, de derecha a
izquierda, y después del secado, de izquierda
a derecha.
Las manchas se identifican como 1: fosfatidilinositol;
2: fosfatidilcolina; 3: fosfatidiletanolamina; 4: ácido
fosfatídico. Los fosfolípidos del girasol migraron de
la misma manera y las placas eran idénticas a la
mostrada.
Tabla 1 - Composiciones de fosfolípidos de los aceites crudos de soja y girasol
Fosfolípidos individuales (%) en el total de fosfolípidos
a
soja
Girasol
mezcla de
variedad master
variedades
Harwood
privett
Farmer
borodulina
Fosfolípido
(este estudio)
(1975)
b
(1973)
c
(este estudio)
(1974)
ácido fosfatídico
4,8
1,5
5,0
2,2
2,2
Fosfatidilinositol
20,3
17,5
14,0
27,9
24,0
Fosfatidiletanolamina
23,3
21,4
26,0
21,2
18,2
Fosfatidilcolina
39,0
43,6
45,0
48,7
55,4
Desconocidos
12,5
4,3
6,3
-
-
a
Basado en análisis de P de los fosfolípidos individuales y totales.
b
La composición también incluyó, cardiolipina - 3,7 %; fitoglicolípidos - 6,1 %; N-acilfosfatidiletanolamina - 1,1 %.
c
La composición también incluyó, fosfatidil glicerol-difosfatidil glicerol - 3,3 %.
