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· R e F I N A C I ó N d e A C e I T e S V e G e T A l e S ·

Análisis por HPLC Preparación de estándares para la promedios de todos los resultados anali-
calibración zados fueron obtenidas de la prueba de
Todos los análisis de los tocofero- Tukey a un valor de P < 0,05 asociada
les (vitamina E) fueron realizados por La totalidad de los estándares y las con un análisis de varianza de una vía
HPLC a temperatura ambiente con un muestras fueron analizadas por tripli- (ANOVA) utilizando el software SPSS
cromatógrafo líquido de alta eficien- cado. Las soluciones madre de α, γ, y 16.0 para Windows.
cia Hitachi (modelo 6200 Hitachi, Ltd., δ-tocoferoles fueron preparadas disol-
Tokio, Japón) equipado con una bomba viendo 0,001 g. de cada tocoferol en 10
inteligente Hitachi L6200, un lazo de ml de metanol-acetonitrilo (30:70 v/v) · Resultados y discusión
inyección de 20 μl, y un detector fluo- en frascos viales de color ámbar, alcan-
rescente Hitachi F1050 controlado con zando una concentración final de 100 Características analíticas de la HPLC
software Chemstations de HP (Hewlett- μg/ml. De la solución madre individual,
Packard, Palo Alto, CA, EE.UU.), junto se prepararon una serie de estándares de Luego de la optimización de las condi-
con una columna Kromasil-100 C18 (25 calibración para los α-tocoferoles (5-50 ciones de la HPLC, se observaron picos
x 0,46 cm de diámetro interno, 5 μm de μg/ml), los γ-tocoferoles (1-50 μg/ml), a los 14,37 min para el δ-tocoferol, a
tamaño de partícula, Teknokroma, Bar- y los δ-tocoferoles (0,04-20 μg/ml), y se los 16,12 min para el γ-tocoferol y a los
celona, España). almacenaron a - 4 ºC. 18,5 min para el α-tocoferol.

Como fase móvil se utilizó una mezcla Para la determinación de los tocoferoles La Figura 1 muestra un cromatogra-
de metanol-acetonitrilo (1:1 v/v) a un individuales, la calibración se logró gra- ma de una mezcla estándar de δ, γ, y
flujo de 1,0 ml/min. (en condiciones ficando la altura promedio de los picos α-tocoferoles (10 μg/ml), que ilustra
isocráticas). La señal de fluorescencia de los estándares versus sus concentra- una separación eficiente de los tocofero-
se midió a longitudes de onda de λ295 ciones conocidas y la inclinación de la les individuales dentro de un período de
nm (excitación) y de λ325 nm (emisión) curva del estándar se calculó utilizando tiempo razonable.
según el procedimiento informado pre- el método de mínimos cuadrados debido Los gráficos de la calibración de los
viamente [14]. a su relación lineal. estándares de δ, γ, y α-tocoferoles en el
sistema de solvente metanol-acetonitrilo
Las muestras de aceites de girasol crudo, Las ecuaciones de regresión proporcio- (30:70 v/v) se muestran en la Figura 2.
neutralizados, blanqueados y desodo- nadas por los tres gráficos diferentes se La linealidad de la curva de calibración
rizados fueron preparadas disolviendo utilizaron para calcular la cantidad de se ubicó en un rango de concentración
0,04 g de cada uno en una mezcla de 2 α, γ, y δ-tocoferoles presentes en cada de 0,04-20 μg/ml para el δ-tocoferol, de
ml de metanol-acetonitrilo (30:70 v/v). muestra. 1-50 μg/ml para el γ-tocoferol y de 5-50
Se seleccionó la mezcla de 30:70 v/v μg/ml para el α-tocoferol. El coeficiente
para lograr la mejor solubilidad de los de correlación para todas las curvas de
tocoferoles. Cada muestra se centrifugó Análisis estadístico los estándares excedió el 0,995, según
durante 30 segundos y el sobrenadante se puede observar en los gráficos indi-
(10 μl) se inyectó en la columna de la Los resultados de todas las muestras ana- viduales de calibración de cada estándar.
HPLC. Se utilizó el mismo procedimien- lizadas fueron expresados como valores
to para preparar las muestras del destila- promedio con desviaciones estándar. En el presente estudio, los pasos de
do del desodorizador tomando 0,0025 g Las diferencias significativas entre los extracción y saponificación fueron total-
de destilado.
Figura 1. Cromatograma de una mezcla estándar de δ, γ, y α-tocoferoles por cromatografía líquida de alta
eficiencia (HPLC).
Se utilizó una cantidad menor de destila-
do del desodorizador debido a su mayor
contenido de tocoferoles. La totalidad
de las muestras fueron preparadas cui-
dadosamente en frascos vial (*) de color
ámbar y fueron purgadas con nitrógeno mV
para evitar la exposición al aire y a la luz
hasta el momento del análisis.
(*) Nota del editor: frasco vial es el que
se utiliza para contener una droga, del
cual se van extrayendo dosis convenien-
tes a medida que se las necesita. Tiempo (minutos)

326 A&G 83 • Tomo XXI • Vol. 2 • 324-329 • (2011)